一、筛选培养基原理
- HAT选择性培养基
融合后的杂交瘤细胞需在含次黄嘌呤（H）、氨基蝶呤（A）、胸腺嘧啶（T）的HAT培养基中培养。氨基蝶呤可阻断DNA合成的主要途径，而骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶（HGPRT）无法通过补救途径存活；杂交瘤细胞则借助脾细胞来源的HGPRT酶存活。
二、专用血清的作用与选择
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胎牛血清的应用
- 提供生长因子、低分子营养物（如氨基酸、维生素）及缓冲能力，减少细胞凋亡和氧化应激。
- 需选用低内毒素、高批间稳定性的专用血清，适用于难养细胞（如杂交瘤、原代细胞）。
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血清浓度优化
实验表明，15%浓度的专用血清可显著提高融合率，1只小鼠脾细胞融合后铺12块板，无需添加饲养细胞或中途换液，平均每板集落数≥3.2个3。
三、操作注意事项
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细胞融合前准备
- 骨髓瘤细胞（如SP2/0-Ag14）需提前培养至足够密度（小鼠：1×10⁸/瓶）。
- 血清分装使用，避免反复冻融污染。
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筛选后培养
融合细胞经HAT筛选后，需在含专用血清的培养基中扩大培养，并通过ELISA、抗原特异性检测（如荧光标记法）进一步筛选阳性克隆。
四、常见问题与解决方案
- 融合率低：可能因血清批次不适配，建议平行测试多批次血清后择优采购3。
- 细胞生长不良：优先检查血清质量（如内毒素水平）、浓度及培养条件（温度、CO₂浓度）。
通过HAT培养基与专用血清的协同使用，可高效筛选出目标杂交瘤细胞，并保障其后续增殖需求